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葛根含量測定方法（葛根素）
2011-04-13
葛根為豆科植物野葛Puerarialobata(Willd.)Ohwi的干燥根。2005版《中國藥典》一部采用高效液相色譜法測定其葛根素的含量。
一、高效液相色譜法
2005版《中國藥典》葛根含量測定項(xiàng)下：
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-水(25：75)為流動相;檢測波長為250nm。理論板數(shù)按葛根素峰計算應(yīng)不得低于4000。
供試品溶液的制備：取本品粉末約0.1g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入30%乙醇50ml，稱定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱定重量，用30%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
HPLC法測定葛根及其制劑中葛根素的含量時，使用最多的流動相系統(tǒng)為甲醇-水系統(tǒng)，另外還有甲醇-水，加醋酸調(diào)節(jié)pH等。
A：以甲醇-水為系統(tǒng)的，常見的比例及實(shí)驗(yàn)條件為：
①Waters2695/ 2996/ Empower 色譜系統(tǒng);色譜柱Symmetry C18柱( 3.9mm×150mm, 5μm);流動相：甲醇-水(25：75);DAD檢測波長254nm;柱溫35℃。
②SP8800 型高效液相色譜泵;Hypersil ODS(4.6mm×250mm,5μm);流動相：甲醇-水(30：70);柱溫40℃;檢測波長250nm。
③Waters高效;十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱(4.6mm×250mm,5μm);甲醇-水(40：60)為流動相;檢測波長為250nm;柱溫30℃。
④美國Spectra-Physics 液相色譜儀;色譜柱Lunm C18(150mm×4.6mm, 5μm ) 不銹鋼柱(美國Phenom enex公司);流動相為甲醇-水(28：72);檢測波長250nm;柱溫30℃。
B：乙腈-水系統(tǒng)：
①LC-10ATvp高效液相色譜儀;Hypersil ODS色譜柱(4.6mm×150mm,5μm);乙腈-水(15：85)為流動相;檢測波長250nm。
②TSP 高效液相色譜儀;色譜柱TurnerC18H37(5μm，4.6mm×150mm);流動相：乙醇-水(43：207);柱溫30℃;檢測波長250nm。
C：加酸調(diào)節(jié)的，如：
①LC-10A高效液相色譜儀;色譜柱為ODSC18柱(5μm，4.6mm×150mm);流動相為甲醇-水(35：65)，內(nèi)含0.01%醋酸;柱溫35℃;檢測波長251nm。
②SP-8800高效液相色譜儀;色譜柱ODS-C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流動相：甲醇-1.4%醋酸溶液( 22：78);柱溫室溫;測定波長: 250nm。
③美國Beckman公司高效液相色譜儀;HypersilODS柱(2.5μm，4.6mm×250mm);流動相為甲醇-氯仿-1.5%冰醋酸(22：1：77);檢測波長250nm。
④SP1000 高效液相色譜泵;色譜柱YMCC18不銹鋼柱(4.6mm×150mm,5μm);流動相：甲醇-水醋酸(42∶100：0.2);檢測波長250nm;柱溫:室溫。
其它如：呂竹芬等測定心血寧滴丸中葛根素的含量，采用高效液相色譜法，Dikma piamonsilC18色譜柱(4.6mm×200mm,5μm)，以甲醇-乙腈-水(30：2：65)為流動相，流速為1.0mL/min，檢測波長250nm。
顏春華等測定腦得生片中葛根素的含量，采用日本島津LC-4A高效液相色譜儀;色譜柱DiamonsilTM (鉆石)C18(200mm×4.6mm,5μm);流動相：乙腈-甲醇-0.1%枸櫞酸溶液(5：25：75);紫外檢測波長250nm;柱溫室溫。
制備樣品溶液時，一般以30%乙醇、50%乙醇、乙醇、甲醇、流動相或鹽酸溶液(9→1000)等為溶劑，采用超聲法提取。
二、其它
楊振林等測定葛根沖劑中葛根素含量，采用薄層- 紫外分光光度法，751GD型(上海分析儀器總廠)。薄層層析硅膠G板,以氯仿-甲醇-水(7：28：0.2)為展開劑,在紫外燈(365nm)下定葛根素位置,刮下斑點(diǎn),用甲醇洗脫,測定波長為251±1nm。
崔小兵等測定通脈顆粒劑中葛根素及阿魏酸的含量，采用雙波長(λ1= 250nm,λ2=313nm) 梯度洗脫法。Waters 2690 型高效液相色譜儀;色譜柱KromasilC18柱(4.6mm×250mm，5μm);柱溫為30℃,甲醇-1%醋酸水梯度洗脫;檢測波長為250nm;柱溫30℃。
方崇波等采用離子絡(luò)合紫外分光光度法測定葛根素及其制劑的含量，采用UV4/2401紫外分光(島津)。方法：:在pH=4.0條件下,葛根素和Al3+形成絡(luò)合物,在339.8nm波長處通過測定吸收度的改變來測定含量
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